SpermMAR-тест (Mixed agglutination reaction)
Иммунологическое бесплодие – антиспермальная глобулиновая оболочка на поверхности сперматозоидов. Она состоит из различных изотипов антител, образуется в яичках, семявыносящих притоках и направлена против различных частей сперматозоида – головки, хвоста, средней части или всей клетки. Эти антитела обнаруживают в 8% случаев мужского бесплодия. Клинически значимыми являются IgG и IgA, которые проявляют цитотоксические и агглюнационные свойства соответственно. При этом, наличие IgA изолированно или в комбинации с IgG, сводят к нулю шансы оплодотворения естественным путём. Таким образом, определение IgA представляется чрезвычайно важным, как для постановки диагноза мужского бесплодия, так и для прогноза зачатия и выработки врачебной стратегии. Необходимо помнить, что антиспермальные IgA обнаруживают только на сперматозоидах и в семенной жидкости, но никогда в сыворотке. Потому, определение антиспермальных IgA в сыворотке крови не имеет смысла.
Итак, объектом исследования при проведении прямого SpermMAR IgA теста являются сперматозоиды свежей спермы или изолированные из семенной жидкости, отмытые и ресуспензированные в культуральной среде. Исследуемые клетки смешивают с частицами, покрытыми антителами к антиспермальным IgA человека. Образование агглютинатов на активно подвижных сперматозоидах указывает на присутствие антиспермальных иммуноглобулинов.
Сбор биологического материала
Эякулят собирают в полном соответствии с требованиями, предъявляемыми к исследованию спермограммы. Образец спермы получают путём мастурбации, собирают в стерильный контейнер или в специальный пластиковый презерватив FertiPro, предназначенный для сбора эякулята. Исследование проводят не позднее 1 часа после эякуляции.
Предварительная подготовка пациента
Эякулят сдаётся после не менее 48-часового и не более 7-дневного полового воздержания. В этот период нельзя принимать алкоголь, лекарственные препараты, за исключением назначенных врачом по жизненным показаниям. Исключить воздействие повышенной температуры (посещение саун, бани, производственная гипертермия, лихорадочные состояния), избегать избыточного воздействия ультрафиолетовых лучей, а также исключить повышенные физические и психические нагрузки. Если в один день планируется спермограмма и/или MAR-тест, и взятие крови из вены, то сначала производится сбор эякулята, а затем венепункция.
Условия хранения и транспортировки эякулята
Срок доставки биоматериала с момента сбора – один час. Во время транспортировки эякулят сохраняют при температуре +27°….+37°. Ограничения: MAR-тест целесообразно назначать только при нормальных показателях спермограммы (количество и подвижность сперматозоидов должно быть в пределах референсных значений). При низкой концентрации подвижных сперматозоидов проводят определение анти спермальных IgG в сыворотке крови методом ИФА.
Ход исследования
Реагенты согревают до комнатной температуры. На предметное стекло наносят 10 мкл спермы и добавляют 10 мкл латексных частиц. Тщательно перемешивают суспензии, накрывают покровным стеклом и микроскопируют на увеличении 40*. Результат читают через 3 минуты, после перемешивания спермы с латексными частицами. Подсчитывают количество активно подвижных сперматозоидов, покрытых латексными частицами на 100 активно подвижных клеток. Диагноз иммунологического бесплодия устанавливают с высокой долей вероятности при обнаружении более 40% активно подвижных сперматозоидов, покрытых латексными частицами.
Референсные значения по содержанию в сперме IgA и IgG:
- <10% - отрицательный MAR-тест;
- 10-39% - есть вероятность иммунологического бесплодия;
- >40% - высокая вероятность наличия иммунологического бесплодия.